flag抗体 flag抗体有杂带

乙肝抗体检查为弱阳性，请问是怎么回事？

Flag标签是由八个氨基酸(DYKDDDDK )组成的短肽，通常被用于重组蛋白质的免疫吸附纯化。其与融合蛋白质之间含有一个肠激酶切割位点，可以通过肠激酶切割被除去。

弱阳性说明有抗体了，但时再去加强一针，此抗体经过一段时间后会慢慢消嗯，就是作为一名新手，爸爸可以想一想自己的父亲之前是怎么做的？就来好好的想一想，好好的分析一下自己应该怎么做失的，因此不要以为打了就万无一失！！！

flag抗体 flag抗体有杂带

flag抗体 flag抗体有杂带

楼上你的化验表好吓人哦 呵呵

你回去看看化验单要是表面抗体 HBsAb是弱阳就意味着你已经开始产生抗体了 不必担心 如果是其它弱阳那就要到医院近一步检查了 我是乙肝携带者 有表抗的人真羡慕啊

如何预测和鉴定miRNA的靶基因

◇多种模式自由选择：自动模式（Auto Mode）、能量模式（Energy Mode）、时间模式（Time Mode）、预设模式（Preset Mode）。

1. 创建miRNA模拟物。

给新手爸爸的使用建议？

2. 将这些miRNA模拟物和pMirTrap载体共转染到哺乳动物细胞，并孵育24小时。同时利用miR-132、pMirTrap载体和pMirTrap对照载体开展对照转染。

3. 利用附带的MirTrap分离试剂盒裂解转染后的细胞培养物。

4. 利用分离试剂盒中的磁珠对RISC复合物（其中包括靶标mRNA）进行免疫沉淀。

5. 利用附带的NucleoSpin RNA XS试剂盒分离与磁珠结合的靶标mRNA。

Sigma-Aldrich的MISSION Target ID cDNA文库让研究人员能够在实验室内开展全转录组范围的miRNA和ncRNA靶基因鉴定。它是个全转录组范围的cDNA文库。在文库转染和选择之后，细胞被已知miRNA转染。对于那些包含与miRNA相互作用的cDNA的细胞，它们将生存到第二轮。那些选择出的cDNA可通过测序来鉴定。这样，研究人员只需投入很少，就能实现大范围的筛选。

靶基因的验证

预测终归是预测，miRNA的靶基因还必须经过验证。这个过程与一开始寻找靶基因的过程相似，也就是抑制或过表达miRNA，然后检查mRNA或蛋白水平的反应。

目前最常用的方法是荧光素酶报告基因法。首先，构建荧光素酶表达载体，将希望鉴定的miRNA靶基因的3’UTR插入荧光素酶基因的3’UTR中，然后将构建好的重组载体转染到细胞中，并改变miRNA的表达水平，检测荧光素酶的表达情况，以分析3’UTR中是否含有miRNA的靶位点。

目前有多家公司提供荧光素酶报告载体或构建服务。Promega就提供pGLO双荧光素酶表达载体。它采用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶这两种报告基因，其中萤火虫荧光素酶（luc2）作为主要报告基因，其表达减少意味着内源性的或外源引入的miRNA 与克隆的miRNA 的靶序列发生了结合；海肾荧光素酶/新霉素基因（hRluc-neo）作为对照报告基因，既能实现归一化处理，又能筛选稳定转染的细胞系。这样就以一个载体实现了以往两个载体的功能。

就目前而言，预测和鉴定miRNA靶基因的方法虽然不少，但仍然没有一种常规方法。随着计算机算法的不断改进和生物学技术的快速发展，这种现状有望改变。

紫外交联仪是一种多用途的紫外辐射系统，主要用于将DNA或RNA交联到尼龙膜、纤维素膜上。交联过程仅需25–50秒。传统的方法是将膜置于真空烘箱中80℃烘烤2小时。与真空烘箱烘焙相比，紫外交联仪照射可使杂交信号显著增加。

紫外交联仪可用于Northern、Southern blotting、EMSA等膜交联，CLIP-seq、iCLIP-seq、PAR-CLIP-seq、pBpa、sulfo-SDA、psoralen等双分子交联以及微生物灭活（例如细菌，真菌，），光稳定性验证，琼脂凝胶中DNA的切割，RecA突变筛选，胸腺二聚体产生的部分限制性内切酶消化，UV灭菌消除PCR污染。在紫外灭菌，聚合物固化（例如水凝胶，树脂）等方面也有应用。

紫外交联仪，VL-1000A（365nm）、VL-1000B（302nm）、VL-1000C（254nm）、VL-3000（三种波长）在功能上有着诸多的优势与特点，比如：

◇多种光源自由选择：254nm(UVC）、302nm（UVB）、365nm（UVA)

◇安全性强：仪器装有安全联锁装置，当门打开或者门关闭不严时会自动关闭紫外光源，保护使用者安全。

◇灯管更换提示功能：当灯管功率小于初始值的60%时，此灯亮，提示用户需要更换灯管。

◇光源分布一致性好：紫外交联仪光源的分布，尤其是中心区域的分布一致性好，能够保证样品各点吸收的能量基本一致。

◇友好、安全的观察窗：观察窗采用3层特殊玻璃，用户可以安全地通过此窗口观察样品和灯的运行状态。

◇ 预设常用实验程序

◇ 不同波长灯管自动识别功能

flag标签多大

4、给宝宝做定期体检的时候，如果孩子没有什么明显不适，不要检查骨密度!不要检查微量元素!如果是看骨密度的话，所有婴儿的检测结果都是缺!这是正常的!真怕缺钙佝偻病，先检查维生素D3含量，到正规医院去检查，医生会多方面综合判断。

FLAG-tag 是一段由8个氨基酸残基组成的, N-在这篇文章里：HEK293T cells were transfected with the indicated VSV or Flag constructs. Immunoprecipitates and cell extracts were ysed by immunoblot.DYKDDDDK-C (1012 Da), 其作用是标记标签. 在蛋白表达和定位研究中, 可以通过基因工程技术手段将所要研究的目的基因和FLAG-tag基因序列连接起来,可以连接在目的蛋白的C端或N端, 然后将整合后的基因转入细胞中或胚胎干细胞抑或受精卵中. 后续检测主要通过FLAG-tag这段肽链形成的免疫决定簇与其单克隆抗体的特异性结合来实现. 检测手段有免疫荧光(immunofluorescence), 免疫印记(Western Blotting)等.

Flag磁珠转3小时够用吗

新手爸爸这样做，育儿更轻松！

够四核心域蛋白2。。

Flag磁珠，也称Anti-Flag免疫磁珠或Flag抗体磁珠，是由高品质的Flag小鼠单克隆抗体与纳米级氨基磁珠共价偶联而成，可特异性地与动植物或微生物裂解液、血清、腹水等中含有Flag标签的蛋白结合，从而用于带有Flag标签的融合蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或纯化，效果非常好，所以转3个小时够用了。

有哪些给新手爸爸的实在建议？

看一看下面的建议：

1. 从母亲背后走出来

在，祖父母帮助带孩子的现象很普遍。这也给爱偷懒的爸爸们(年轻的爸爸可能略多一点)找到了借口：我母亲替我完成了相当一部分，我偷偷懒倒也无妨。 实际上，我们一直没有搞明白一件事情——父亲的角色是不可替代的。在宝宝的成长过程中，父亲起着非常重要的作用。所以，我们需要从母亲的背后走出来，去承担属于自己的那份。

2. 相信自己能成为好父亲

就像梁静茹在歌中唱的那样，“爱真的需要勇气”。面对刚刚来到世间的小宝宝，年轻的爸爸也需要足够的勇气来接纳孩子，同时也接纳小宝宝所带来的诸多变化。 而且，我们还要相信自己一定能成为一个好父亲，因为有了这种自信，我们就成功了一半。我们既然能够成为很出色的工程师、设计师、律师……那么，给孩子换换尿布、冲冲奶粉这样的熟练工种自然也不在话下了！

3. 体会“被爱”

很多“大男孩”型的父亲在被妻子照顾得十分周到的时候，这种桌子亮亮的、饭菜香香的、妻子乖乖的感受就成为了一种常态。妻子靠着那份浓浓的爱意坚持着，而丈夫却渐渐体会不到这种“被爱”的感觉了。所以，在爱宝宝之前，爸爸们首先需要让自己情感的神经更敏锐一些。 当我们重新获得那种美好的感觉时，我们也很愿意将我们的爱溶入到这个暖融融的小家庭里面。当我们看到宝宝朝自己笑一笑，大眼睛很专注地看着自己的时候，那种感受就是被爱了。

即使我们在很多有关孕期的书中都读到过在妻子生产后有可能会出现产后抑郁的情况，但是，面对妻子诸多的“无理取闹”，自己心里还是觉得有些忍无可忍。这时候，夫妻关系会面临一场始料不及的考验。 加之妻子把所有的经历和温情都投向了孩子，好像原来的甜蜜爱情一下子就蒸发掉了。这种受冷落的感觉可能会让你用同样的办法来对付妻子和刚出生的小宝宝。于是，原本充满温情的家庭陷入了一种冷战状态。 实际上，所有问题的根源就在于在妻子生产前，我们没有做好充分的心理准备：宝宝出生后，我们需要做什么，不仅是照顾宝宝的饮食起居，还要对妻子关怀备至，不仅照顾她的身体，还要照顾她的情绪。这样的话，妻子出现产后抑郁的几率会小得多。即使出现了这种情况，我们也能很快帮助她度过。 当夫妻间意见出现分歧的时候，双方都没有必要通过一味地坚持来使自己处于强势的地位。彼此间需要真诚地沟通，搞清楚怎么做对家庭的成长、夫妻间关系的成熟以及孩子的成长是最有利的。

5. 参与网络育儿生活

孩子在成长过程中爱玩好动。这时候，他们需要父亲强有力的臂膀。所以，我们首先要有足够的热情参与进来，和儿子一起玩组装玩具、研究各种汽车模型，和女儿用布娃娃过家家，给她讲白雪公主的故事。 和孩子们在一起的时候，你会发现他们的创造力是无穷的，但是对某些游戏又是那么执著，捉迷藏、被爸爸举得高高的……对这样的游戏，我们不妨时不时地和孩子玩一下。你会发现小家伙的兴致会马上被你调动起来。

7. 承担起教育孩子的

而今，好爸爸的标准不仅仅是帮妻子做一些简单的家务，和孩子做做游戏那么简单。好爸爸们还需要在孩子的教育问题上发挥作用。我们教育的主导方向是什么？我们要给孩子一个怎样的童年？有了这些愿望，又该如何一步一步去实现？ 这些都不仅仅是妈妈们应该思考的问题，爸爸们同样需要有自己的主张，然后通过协商和妻子达成共识。在执行的时候，我们不仅是监督者和评判者，更是实践者。

做为新手爸爸，一定要相信自己，学习别人的优WAP四核心域蛋白2(WFDC2)重组蛋白多年致力于重组蛋白表达，抗体制备研究，目前拥有大量的商业化表达载体质粒包括多种标签质粒(His，GST，SUMO，FLAG等标签)以及高质量的扩增和表达菌株(包括低温诱导表达菌株，10-16℃低温诱导表达)，以保证每一个重组蛋白表达的品质。秀地方。

1、不要说你帮宝妈做了什么。只要是孩子的事情，除了母乳亲喂，妈妈能做的，你也可以做，甚至可以上位做个“主导者”。

2、花点心思陪伴解读孩子。

花点时间和心思陪伴孩子和她。

3、发挥理性思维特长析问题找出解决办法。

碎片化的时间和睡眠可能会导致妈妈们焦虑和情绪化，碰到问题时很容易慌乱。发挥下你男性理性思维的特长，分析问题，动手找出解决办法。

大部分时候，新手爸爸是家中经济顶梁柱，所以请记住，顶梁柱，要顶住，任何时候都不能塌。这一点非常重要！育儿过程中大部分问题，都是可以通过赚钱来解决的。增强赚钱能力是位。

没钱，娃喝什么奶粉？老婆吃什么？没钱哪来的浪漫？不会带娃？不会喂奶？不要紧，请个月嫂。不会坐月子？不懂产后护理？不要紧，月子会所都有。世界上有无数可以靠RMB解决的问题，所以，请尽可能，提高你的赚钱能力，成为全家人的坚实后盾和依靠。

主升技能：抱娃、喂奶+拍奶嗝、换尿布提升：给娃洗澡、哄睡、带娃、疾病护理、幼儿教育能给妻子减负一点是一点，老婆在家辛苦一整天了，晚上让老婆好好休息一下，多多理解老婆的辛苦，用实际行动给老婆分担带娃压力，替老婆承担一点家庭，非常必要。新手期的爸爸，认为只带孩子不上班是一份很轻松的工作；而老手爸爸在体验过带娃的艰辛后，终于理解了孩子不容易。其次是要多渠道了解育儿知识。既然你已经看到这个回答，说明你已经愿意好好学习育儿知识了。

划重点：戒烟戒酒戒游戏，当好榜样当爸爸你已经是当爸爸的人了，不在是大男孩了。婚前婚后各种坏毛病，下定决心该改的都得改。你肯定也不希望下一代抽烟喝酒打游戏吧。那么，先从自己做起。以前立过的FLAG，捡起来，先让自己成为自己期望的样子，然后才拥有榜样的力量，才能带娃起飞。

做到以上几点，基本就是一个的爸爸了！

当我们长大以后，就要恋爱、结婚、成家、生子。这个过程，给我们的生活带来了非常大的变化，同时也让我们面临着全新的生活状态。……因此，当我们初为人父为人母的时候，如何能够做到，是我们需要认真思考，并努力做好的一件重要的事。

具体来说，对于那些新手爸爸，需要注意以下几件事：

1，勇于承担，争取做一个合格的爸爸。

初为人父，自己心中会感到非常开心。……但同时，自己也必须明白，这时候的自己所肩负的有多么重大……因此，这时候自己必须要明确自己所要承担的，把自己该做的事情做到，这样才能成为一名合格的父亲。

2，为抚养和教育自己的孩子做好充分准备。

当自己有了孩子以后，就要将他抚养长大，并对他进行培养教育，帮助他健康成长。……这需要自己提前做好相关准备，这样才能在接下来的时间里，更好地履行自己做爸爸的职责。

3，给自己的妻子的帮助，让她更轻松一些。

有了孩子以后，自己要拿出更多的时间和更大的精力来照顾家庭……这样一来，势必会影响自己的工作。

因此，作为新手爸爸来说，必须学会合理分配时间和精力，让自己能够兼顾工作与生活，从而让自己做到生活事业两不误、工作和生活都达到状态……这样自己才能成为最成功的父亲。

1.先照顾好妈妈，再照顾幼儿，是家庭其他关系。

2.储备一定的育儿知识，不要等到老婆问什么都不知道，就算遇到不懂的也应该时间查资料，多查资料多问多思考，给老婆提供可执行的建议，而不是一问三不知。

3.天气好的时候多带老婆孩子出去走动走动，并且主动抱崽，多晒太阳心情会变好。

因为我现在还是一名学生，也并不是什么方面的专家。我就从一个孩子的角度，提供一些新手爸爸在情感和生活上能够做出的支持吧！

1.有了自己的孩子之后，也不要忽略妻子的感受，甚至要更加的维护夫妻之间的情感和情怀。之前有一个热播的电视剧，叫做《亲爱的小孩》，其中就向我们呈现了方方面面因为有孩子之后家庭发生的一些变化，希望新手爸爸们能够不要忽略了家人们的一些感受。

电视剧《亲爱的小孩》剧照

2.新手爸爸们要多多注意自己的生活习惯。新生儿是很脆弱的，一些不良的生活习惯，比如吸烟，不注意个人卫生，等等都会带来各种各样的细菌污染，对新生儿的健康有非常的伤害。

3.多读一些育儿方面有关的书籍。抚养孩子本身就是一个家庭的事情，父亲们不要因为自己是一名男性，就忽略了自己在这方面扮演的重要角色，要相信任何一个生命对于情感的感知都是非常敏锐的。

幸福的一家人

尽早深度参与孕育

我没有大量的数据证明，从亲自实施的情况来看，爸爸尽早、深度参与孕育可以显著增强妈信心，后期妈妈也会放心将更多事情交给你做，有效缓解妈焦虑情绪，抵抗产后抑郁。

花点时间，了解下孕产知识，当她因为小腹抽痛担心害怕时，你可以安抚一下，告诉她可能是快速增长有些牵拉感疼痛。

了解下孕期需要吃的补充剂，买回来，该吃的时候拿给她。比如钙、DHA、复合维生素等。

做好后勤工作，包括但不限于家务、饮食搭配、锻炼身体、情绪管理等。

在孕产医院选择、奶粉成分对比、尿不湿性价比对比、婴儿车选择上给出专业的建议，好让她做决定。

2、宝宝出生后，一定要在一个月内给宝宝办理新生儿，越早越好!这样从宝宝出生之日起就能享受待遇，出生后的医疗费用都可以报销，能省不少钱。如果超过这个时间去办理，就不算新生儿，那就只能第二年才能享受待遇，这期间的医疗费都得自己出。

3、经济条件不是很紧张的话，一定要给孩子买一份意外险和医疗险，一年几百块，可以报销不能报的费，非常实用!特别是家里养了宠物的，平时磕伤拌伤，猫抓狗咬的意外险都能报;小孩子抵抗弱，感冒发烧也是常有，医疗险就可以用来补充报销不能报的部分;如果有预算的话，也可以给孩子买一份重疾险以防万一。

5、有些宝宝出生后黄疸高可能得住院照蓝光，这时宝妈一定要坚持喂奶或者用吸奶器吸奶，不然很容易把奶憋回去!一定要注意。

6、6个月内的婴儿，稀很常见，一般都是肠功能不完善，消化不良的原因，不要变“屎奴”，只要不是蛋花样的便、不带血丝，一般没事哦。

7、带孩子晒晒太阳很重要!不要因为冬天天冷就光在阳台晒，没啥用，一天晒1-2小时太阳!从开始的十几分钟逐渐增加时长，避免直射。

8、小月龄宝宝选纯棉、纱布类服饰床品。我家一岁内穿的最多的就是童泰的衣服，尺码准、性价比高。

9、6个月内纯母乳喂养的宝宝真的不用额外喂水，除非生病、发烧上火这类的~退热贴、肚脐贴这些，我记得有个知名儿科医生说过，不建议用哈

10、新生儿睡觉不用枕头，2岁以内可以不用枕头~定型枕这东西没啥用，给孩子勤换左右睡姿才管用，这样才不会睡偏头

11、玩具不用一下子买太多，个人经验，半岁内的宝宝一般也就玩个抚触球、摇铃、黑白卡片、安抚海马、床铃。

我家现在一岁多，两套卡片上的图画都认全了~

12、产褥期宝妈一定要好好休养，不要觉得孕期壮的像头牛就不注意!别碰凉的东西，以后会手指僵胀疼!不要经常弯腰换尿不湿，腰疼的几率98%!

一：家庭角色的分享

在如今这个时代，不管是男人还是女人都在为家庭做着非常大的努力和贡献，而很多家庭会因为谁付出的多而争论不休，因为家里有宝宝的出现，所以夫妻从二人世界变成三口之家，这个时候新手爸爸需要做的不仅仅是养家糊口，还需要在空闲的时间里学会照顾宝宝，这个过程的付出会让新手爸爸更好的在有宝宝的这个新的家庭氛围当中找到自己的位置，并且对家庭的和谐和温馨起到促进的作用和影响。

二：合理的安排时间

宝爸在宝妈照顾宝宝的阶段能够充分感受到宝辛苦，而为了宝妈能够有更多的精力和良好的情绪去照顾宝宝，需要宝爸在一些阶段接替宝妈照顾宝宝的相关工作，并给予宝妈一些时间休息、放松情绪等，如果一个宝爸能够做好宝时间安排，那么不但会让宝妈感受到幸福，还会让亲子关系得到进一步的提高和改善。所以这是一举多得事情。

不得不说家里有了宝宝睡眠这件事就变得很，而作为父亲一方面要顾及到妻子的辛苦，另一方面还需要考虑到宝宝需要细心的照顾，而这样的过程中作为新手爸爸总会感觉到睡眠不足，而这样的状态下去应对工作、财务和人际关系难免会感觉到焦头烂额，对此需要新手爸爸们采取积极的策略来缓解内心的紧张，并且可以通过运动、调整睡眠时间、减少应酬等方式来恢复自己的精神状态。

给新手爸爸的事，再经营了，很多下闵度就分成三点来给大家阐述一下。

首先点呢

其次，第二点。

就是要结合自己的实际情况，结合自己的家庭6. 通过qPCR或新一代测序分析分离出的RNA，鉴定出特定miRNA的靶标mRNA。处境，还有自己父母的一些情况来想想好好的，怎么教育孩子？怎么做孩子心中理想的父母怎么样呢？才能满足自己家里的需求，怎么样呢？才能方便了父母方便了，妻子，然后方便了很多亲戚啊，朋友啊，等。工作方面还有亲情方面的事情。

一点了。

应该好好的规划一下孩子的未来，要学一些基本的教育的那些。的方式。来能够好好的教育孩子，同时你也给到孩子一个很好的经济条件，同时也要。规划好孩子的房间啊，等一些实际问题。

用激光共聚焦可以看得出同时加了egfp和flag标签的质粒吗

三：应对被压缩的睡眠时间

质粒是看不见的~你所能看见的是：egfp表达出gdf蛋白~在紫外激发下会发绿光~flag标签单纯是一个蛋白质也看不见~需要flag抗体以及荧光二当夫妻二人有了孩子以后，妻子所承担的会更多……这时候，做丈夫的应该主动替妻子承担，让她能够更加轻松一些，这样才能让一家人其乐融融，生活更加开心快乐。抗~然后在激光共聚焦显微镜相应波长光线的激发下会发光~

【高分急求】免疫印迹和免疫共沉淀结果图分析

问题1： IP，代表的是用该蛋白来沉淀，然后用IB的抗体来识别。

先占坑。题主应该把图下的说明也一起放过来的。

不要以为育儿就是妈妈们的天下，实际上那里有很多铁杆父亲呢！而且，育儿里，还有专门属于爸爸们的领地。我们可以在网上和那些与自己一样的年轻爸爸交流一下初为人父的感觉和经验，SHOW一SHOW宝宝的靓照，维护一下宝宝的个人主页，或者向有经验的爸爸们取取经。 可以说，网络为我们提供了一个既开放又很休闲的空间。在这样一个充满了家的温情的地方，对面爸爸的一声招呼、一声问候都有助于我们很快地进入角色。 6. 和孩子一起重回童年

问题1、为什么个电泳图左边标了IP:Flag和IB：VSV？到底是IP还是IB的结果？

答：IB每次只能检一种蛋白，所以要检两种蛋白的话，就需要检两次，一次是用是VSV抗体，一次是用标签抗体Flag；IP是共沉淀，多种蛋白均是带Flag标签表达的，所以一个Flag可以检出多种蛋白。

分析下图B哈，图B被分成3个部分，先看最上面的一条，意思是，RIP1、RIP2、RIP3、RIP4和cardif这几个蛋白都融合了一个标签蛋白Flag，用Flag的抗体做IP后，再用VSV的抗体做IB，所显示出的条带。可以看到，只用Flag标签蛋白抗体做IP，再用VSV抗体做IB是检不出VSV条带的；而用RIP1、RIP2、RIP3、RIP4和cardif这标签蛋白IP后再IB可以检到不浓度的VSV蛋白，说明了VSV与这5个蛋白有不同浓度的相互作用。图B中间的部分意思是，用flag标签抗体做IP后，产物用Flag抗体做IB有不同大小的条带，说明IP过程是成功地将Flag标签融合蛋白富集纯化的。有的条带不只一条，可能蛋白分解或抗体不特异吧。

哎呀，你这个太复杂，这样说实在太啰嗦，总之呢，你多看看的说明，多看看IP与IB的原理，很好懂的。

以上仅供参考，如有错误，概不负责，哈哈……

这位同学，你既然知道了原图的出处，就应该仔细分析一下文献。

问题2：你要看原图，有不同载体的结构，那些条带是相对于不同载体所表达出的蛋白。

问题3：这个是作为加样对照，标示加样量是一致的

问题4：抗体比较好，容易获得，不用针对每一种不同的蛋白采用不同的抗体

问题5：用FLAG做IP，而IB出现结果，说明这两个融合蛋白是相互结合的，光有FLAG，没有RIP不结合。

还有的回答：因为这个图研究的是不同的融合蛋白（看原文），两个条带是因为有磷酸化的发生

图表里面flag后面加蛋白是什么意思

是一种希望我的回答能够为您带来帮助，祝您生活美满，家庭幸福！标签，多用于蛋白检测或者纯化。

做细胞定位时会用到 它是插入目的质粒的一段DNA序列 转染到细胞后 综上所述， 该研究确定了CspC的调控目标，并揭示了CspC响应宿主体内环境变化的调控机制。 CspC进入宿主后乙酰化修饰丰度增加，减弱了CspC对于三型分泌系统基因的翻译抑制作用，进而增强了铜绿单胞菌的毒力。可以表达出与接下来的抗体结合的蛋白（也可以说是 抗原）然后就可以通过免疫荧光方法检测到目的蛋白的表达位置。

CspC乙酰化助力铜绿单胞菌在宿主体内“兴风作浪”

黑白卡片、彩色卡片强烈!新生儿锻炼视觉、6个月左右练习手部精细动作、1岁时宝宝发音、识图、整理，一套多用，可以用到1岁多。

病原菌进入宿主后面临多重挑战，调整基因表达来响应环境变化对于细菌在宿主体内的生存至关重要。哺乳动物宿主的体温通常为37°C左右，是细菌毒力基因表达实现成功定植的关键信号[1]。前期的研究发现将近400个基因在温度变化时（28°C vs 37°C）显示异表达，其中包括三型分泌系统相关基因。三型分泌系统（Type III Secretion System, T3SS）是革兰氏阴性菌的一个由多组分蛋白复合体形成的跨膜通道，它通过分泌蛋白，或把这些毒力蛋白直接注入宿主细胞中发挥致病作用[2]。 三型分泌系统高度耗能，因此其表达受到严格调控，但具体调控机制尚不十分明确。

但是商业保险坑很多，要谨慎购买，如果自己不懂的话，是找专业的第三方机构咨询，定制方案，避免踩坑。

近日，南开大学 吴卫辉 课题组在 Nucleic Acid Research （IF=16.97) 上发表题为 Acetylation of the CspA family protein CspC controls the type III secretion through translational regulation of exsA in Pseudomonas aeruginosa 的研究论文， 揭示了铜绿单胞菌CspA家族蛋白CspC通过与exsA mRNA的5'UTR结合调控exsA的翻译。环境温度变化时，CspC乙酰化修饰增多影响其对的结合能力，从而影响对exsA的翻译作用。 景杰生物为该研究提供了基于 LC-MS/MS的乙酰化修饰组学分析 和乙酰化泛抗体（PTM-101）。

CspA属于冷休克蛋白家族，可与mRNA结合参与调控多种生物学过程及响应环境变化。铜绿单胞菌野生型菌株PA14含有五个CspA同源基因，分别为PA0456 (CspC) , PA0961, PA1159, PA2622 (cspD)和PA3266 (capB), 它们都受到温度变化的调节。作者发现 CspC的突变可增加肺部感染，且其毒力的增强与细菌的生长速度关系不大。 接下来，作者探究了CspC的突变后细菌的毒力增强的原因。作者比较了突变体和野生型菌株的转录组， 共发现174个异基因。其中，所有T3SS基因在cspC突变体中表达都升高。 同时，这一结果也在蛋白水平上得到一致的映证。这些结果表明 CspC对T3SS基因有负调控作用。

图 PA0456（CspC）的突变增加了小鼠急性肺炎感染时的细菌毒力

ExsA/C是T3SS的关键基因，CspC调控exsC启动子的活性，但不调控exsA启动子的活性。为了探究CspC对exsA的调节机制，作者在野生型菌株PA14中过表达C端带GST标前的CspC（CspC-GST）或单独的GST蛋白，并进行RIP-seq分析。结果显示， exsA mRNA及其5 'UTR被 CspC-GST显著富集，表明CspC可能在转录后水平对exsA进行调节。 随后，作者构建了Ptac-5’UTR-exsA-FLAG载体，通过不断缩短5’ UTR长度和观测表达量，最终将关键调控区域缩小到74 nt序列。

图 CspC 在转录后水平控制exsA的表达

利用Ptac-74 nt-exsA-FLAG，作者发现野生型PA14在37°C时的ExsA的蛋白水平比在25°C时高2.95倍。在cspC突变体中，exsA的蛋白水平分别比野生型PA14在25°C和37°C时高4.6倍和1.9倍，表明CspC在25°C时对exsA的翻译抑制作用更强。然而，CspC的转录和蛋白水平在两个温度下相不大，暗示着异可能由蛋白翻译后修饰引起。通过 LC-MS/MS分析 ，作者发现CspC的K41位有乙酰化修饰，且这种修饰的丰度在37°C中高于25°C（从25°C到37°C，模拟细菌由环境中进入哺乳动物宿主体内)。

图 CspC蛋白K41存在乙酰化修饰

为了探究K41乙酰化是否影响了CspC功能，作者构建了cspC的K41Q和K41R突变体版本，分别用于模拟乙酰化和未乙酰化状态。结果显示K41R CspC-74 nt ssDNA的亲和力比 K41Q CspC-74 nt ssDNA的亲和力约高10倍。过表达K41R cspC降低exsA、exsC和pcrV的mRNA水平，而过表达K41Q cspC 则不影响它们的表达。随后，作者使用Ptac-74-exsA-FLAG检测了cspC突变体对exsA翻译的影响。与野生型cspC相比，cspC K41Q突变后不能抑制exsA-FLAG的翻译，而K41R cspC可抑制exsA-FLAG 的产生，并导致在25°C和37°C下的exsA蛋白水平相当，即 造成了对exsA翻译的组成性抑制。

图 CspC K41乙酰化调控 exsA 翻译

为了确认这种机制是否调控体内感染，作者用CspC天然启动子驱动的cspC-GST的突变体感染小鼠。与细胞实验相比，在从受感染小鼠中分离的CspC有更高水平的乙酰化。与cspC突变体相比，感染表达cspC (K41R) 的cspC突变体导致宿主细菌载量和宿主炎症反应降低。然而，cspC (K41Q) 不影响cspC突变体的细菌载量或宿主炎症反应。 这些结果表明CspC在动物体内的活性受K41乙酰化的影响。

图 CspC K41位点突变影响CspC在体内的功能